Stagiaire en biotechnologie

L’équipe d’accueil travaille sur une nouvelle approche de thérapie génique de la drépanocytose. Cette approche repose sur l’utilisation de vecteurs lentiviraux codant pour une beta-globine modifiée, capable de contrecarrer les effets aggrégants de la mutation pathologique dans les globules rouges. L’obtention de vecteurs ayant des titres infectieux élevés est un enjeu majeur pour cette stratégie car cela permettait d’obtenir de forts niveaux de transduction des cellules souches hématopoiéitiques et ainsi d’obtenir une correction efficace dans le sang des patients. Le stage a donc pour objectif d’améliorer la production d’un vecteur beta-globine grâce à de nouvelles approches d’ingénierie des cellules productrices. Cette approche reposera sur l’utilisation de la nouvelle technologie CRISPR

Le.a stagiaire aura pour mission de tester des ARN guides préalablement identifiés au laboratoire sur les cellules productrices de vecteurs pour démontrer qu’ils augmentent de manière spécifique la production de particules infectieuses de vecteurs. Un gène rapporteur codant pour une protéine fluorescente sera utilisé. Ce stage demandera de mettre en œuvre des méthodes de culture cellulaire, de transfection, de PCR et de cytométrie en flux. Le.a stagiaire sera encadré.e pour transfecter des cellules avec des plasmides, pour mesurer l’expression du gène rapporteur par cytométrie, et pour titrer les vecteurs produits par PCR quantitative et cytométrie en flux.